細(xì)胞培(péi)養是(shì)指從(cóng)生物體取出組(zǔ)織，分離(lí)的原代細胞或細胞系(xì)，在體(tǐ)外(wài)模(mó)拟體(tǐ)内生理環(huán)境（無(wú)菌，适宜溫(wēn)度，ph值(zhí)和一(yī)定(dìng)營養條(tiáo)件）等(děng)特定的條(tiáo)件下培養(yǎng)，使之(zhī)生存并(bìng)生長。細胞培養是(shì)生命(mìng)科學的(de)基礎，目(mù)前細(xì)胞培(péi)養工作已廣(guǎng)泛應用(yòng)于生物(wù)學(xué)、醫學(xué)、新藥研發(fā)等各(gè)個領域。

這期主(zhǔ)題主(zhǔ)要圍繞細(xì)胞培養，向大家(jiā)簡單介紹細胞(bāo)培養(yǎng)相關(guān)的一(yī)些内(nèi)容，如細胞(bāo)培養(yǎng)的具(jù)體流(liú)程、細(xì)胞培養所(suǒ)需的(de)條件、細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)的(de)注(zhù)意事(shì)項及問題分析等。細(xì)胞培(péi)養的(de)具體(tǐ)流(liú)程(chéng)主要(yào)分爲:細胞複蘇、細胞(bāo)傳(chuán)代(dài)、細胞(bāo)凍存。

本期(qī)讓我(wǒ)們先(xiān)來了(le)解一(yī)下

——關(guān)于細胞複(fú)蘇的(de)相關(guān)内容

一、什麽是細胞(bāo)複蘇？

細胞複蘇是将(jiāng)休眠(mián)的細(xì)胞重(zhòng)新活(huó)化,使(shǐ)之重(zhòng)新生長進入細胞周(zhōu)期,進而分裂産生子細胞的過程。

二(èr)、細胞複蘇的實(shí)驗操作步驟

1、從液氮罐或(huò)-80℃冰箱(xiāng)中取出凍存管(guǎn)，用冰(bīng)盒将其轉(zhuǎn)移至細(xì)胞房，迅(xùn)速将凍存管投(tóu)入到(dào)已經預熱(rè)的水浴(yù)鍋中迅(xùn)速解(jiě)凍，并(bìng)不斷(duàn)的搖(yáo)動，使管中(zhōng)的液體迅速(sù)融(róng)化。

2、約1-2min後凍存管(guǎn)内液(yè)體(tǐ)完全溶(róng)解，取出用酒精(jīng)棉球擦(cā)拭或酒(jiǔ)精噴灑凍存管(guǎn)的外(wài)壁，再(zài)拿入超淨(jìng)台内(nèi)，用移(yí)液槍将細胞液(yè)轉移至含有5ml完(wán)全培養基(jī)的(de)15ml離(lí)心管中，1000rpm離(lí)心5min。

3、棄去上清(qīng)，用(yòng)1ml完全培養基重懸細(xì)胞團塊，制備細(xì)胞懸(xuán)液，然(rán)後(hòu)将(jiāng)細胞懸液(yè)加進含有4ml完(wán)全培養(yǎng)基的(de)細胞培養瓶中，蓋上瓶蓋(gài)混勻。

4、将細(xì)胞(bāo)培養瓶放入37℃、5%co2培養(yǎng)箱中(zhōng)培養。

注意事項

1.細胞複蘇(sū)的原則爲快速(sù)融化(huà)：必須将凍(dòng)存在(zài)-196℃液氮(dàn)中的(de)細胞(bāo)快(kuài)速融化(huà)至37℃，使(shǐ)細胞(bāo)外凍存時(shí)的冰晶迅(xùn)速融化，避免(miǎn)冰晶緩(huǎn)慢融(róng)化時(shí)進入(rù)細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細胞(bāo)造成損害(hài)。

2.水浴鍋一(yī)定要提前(qián)預熱到37℃。

3.一次性(xìng)在水(shuǐ)浴(yù)鍋内融(róng)化的凍存(cún)管不要太多(duō)，會導緻(zhì)傳熱不佳(jiā)，延長融化(huà)時間(jiān)，對細(xì)胞造成(chéng)損害。

4.實(shí)驗過(guò)程中每次(cì)将物品拿進超(chāo)淨台(tái)中前(qián)，一(yī)定(dìng)要向其噴(pēn)灑75%酒(jiǔ)精消毒(dú)，或(huò)用酒(jiǔ)精棉(mián)球擦拭，防止污染，實(shí)驗全(quán)程無菌操(cāo)作。

5.對(duì)于某些(xiē)細胞比(bǐ)較脆弱(ruò)，完全培(péi)養基需(xū)要提前(qián)預熱後再(zài)使用(yòng)。