細胞培養中的常用試劑

動物細胞或組織(zhī)離開(kāi)體内到體外進行培養時，需要(yào)爲其提供生長所需(xū)的各種營養物質以及爲了讓細胞在體(tǐ)外能夠更好的生長所需要的各種試劑(jì)。本期就簡單向大家介紹(shào)一下細胞在培養過程中所用到的一些試劑成分以及它們的作用。

01 細胞培(péi)養基成分

(1).基礎培養基  

常見的基礎培養基主要(yào)有MEM，DMEM，RPMI，主要提供包含葡萄(táo)糖、氨基(jī)酸、水、微量元素，碳酸氫(qīng)鈉等的緩沖體系。

● 谷氨酰胺    

是細胞生長所必須的必需氨基酸，參(cān)與蛋(dàn)白質合成和核酸(suān)代謝。

● 酚紅指示劑

一種常用的酸堿(jiǎn)指示劑，在酸性(xìng)時顯黃色，中性時顯紅色，堿(jiǎn)性時爲紫色，酚紅在培養基(jī)中作爲PH值的指示劑。

● 碳酸鹽/PH緩沖系統

一種生理PH緩沖系統，由于細胞代謝過程中産酸，培養基中的HCO3-會逐漸被消耗掉，所以需及時補充CO2才能維持PH維(wéi)持在一定範圍内。

(2).動物(wù)血清

在基礎培養基中加入2%-20%血(xuè)清成爲完全培(péi)養基，血清(qīng)不(bú)僅可以爲細胞提供生長所需的基本營養物(wù)質，還含有生長因子、激素、微量元素和離子等參與細(xì)胞代謝的重要成分。

(3).抗生素

爲了防止細胞在培養過程被污染，通常會向完全培養基(jī)中添加青黴素-鏈黴素混合液(yè)，即雙抗，青黴素主要對革蘭氏(shì)陽性(xìng)菌有效，鏈黴素對許多革(gé)蘭氏陰性菌有效。

02 胰蛋白酶-EDTA

胰(yí)蛋白酶可使細胞間(jiān)的蛋白質水解(jiě)進而細胞離散開，EDTA是一種化學螯(áo)合劑，毒性小，對貼壁細(xì)胞有離散作用，兩者聯合使用，分散細胞的效力更高，這一步被稱爲消化細胞。對于不同細(xì)胞而言，對于胰(yí)酶使(shǐ)用時的溫(wēn)度、時間、濃(nóng)度都有不同的要求，消化不足，細胞不能被消化下來，消化過度會造成細胞損傷。因培養基中的血清可以降低胰酶的活性，通常使用完全培養基來終止細胞消化。

03 PBS緩沖液(yè)

PBS是(shì)磷酸緩(huǎn)沖鹽溶液，具有鹽(yán)平(píng)衡、可調整的适宜PH緩(huǎn)沖作用，一般用來(lái)清洗細胞，可維持細胞(bāo)滲透壓。

04 二(èr)甲基(jī)亞砜(DMSO)

一種(zhǒng)重要(yào)的滲透型細(xì)胞保護劑，是細胞(bāo)凍存液中的重要(yào)成(chéng)分。細胞在凍存過程中，DMSO能快速穿透細胞(bāo)膜進入細胞内，降低(dī)冰點、延(yán)緩凍存過程、提高(gāo)細胞内離子濃度，減少細胞内冰晶的形成(chéng)，可減少細胞損傷。

05 支原體抑制劑(jì)

支原體污染在細胞培(péi)養過程(chéng)中常見的一種(zhǒng)污染源，然而在污染初期可以使用支(zhī)原體抑制劑來消(xiāo)除細胞液中的支原體，使實驗可以繼續進行下去(qù)。

06 台(tái)盼藍染(rǎn)料

一種檢測細胞膜完整性常用的生物染色試劑。死細胞由于細(xì)胞膜的完整性(xìng)喪失，通透性增加(jiā)，細胞可被台(tái)盼藍(lán)染成藍色，而活細胞因爲有完整地(dì)細胞膜，能夠(gòu)排斥台盼藍進入細胞内，因此不會被染色。在顯微鏡下通(tōng)過細胞顔色可以(yǐ)辨别活(huó)死細胞，方便活細胞計數。

捷美JIMEI

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