随着(zhe)生物醫(yī)藥的(de)飛速發展(zhǎn)，哺乳(rǔ)動物細胞(bāo)已被(bèi)廣泛用于(yú)重組蛋白、疫苗(miáo)、抗癌試(shì)劑(jì)及其(qí)他臨(lín)床相(xiàng)關的(de)藥物的生産中(zhōng)。

現有的哺乳動物表(biǎo)達系統包(bāo)括中(zhōng)國(guó)倉鼠卵巢（cho）細(xì)胞，齧(niè)齒動(dòng)物細胞(bāo)系(xì)（Ｎso, bhk, sp2/0）和人(rén)類細胞系（Ｈek293細胞(bāo), per.c6, cap, 纖維瘤），其中cho細胞和Ｈek293細胞占據(jù)重要地位(wèi)。

本期(qī)主要簡述cho細胞(bāo)的發展及(jí)蛋白表達(dá)系統的特點

1、cho細(xì)胞蛋(dàn)白表(biǎo)達系統特點

（1）能(néng)在無(wú)血清、化學成分限定的培(péi)養基中(zhōng)懸(xuán)浮培養，穩(wěn)定生長，（快(kuài)速、高(gāo)産、安(ān)全）；

（2）在(zài)對人(rén)類緻(zhì)病性(xìng)病毒方面具有(yǒu)一定的安全性(xìng)；

（3）能夠(gòu)表達與人(rén)相似的翻(fān)譯後(hòu)修飾；

（4）較少分泌内源性蛋白，降(jiàng)低下遊(yóu)流程的難度(dù)；

（5）易(yì)于基因調控（dhfr 或 gs缺(quē)陷型(xíng)）；

（6）可瞬轉或穩轉(zhuǎn)表達蛋白(bái)。

2、cho細胞(bāo)的發展

cho細胞來自于1958年由(yóu)puck分離(lí)的具有無(wú)性繁(fán)殖性和自發永(yǒng)生性(xìng)的中(zhōng)華倉鼠卵巢(cháo)細(xì)胞。cho細胞主(zhǔ)要包括cho-k1, cho-s，cho-dxb11和(hé)cho-dg44。

cho-k1

cho-k1是未經改(gǎi)造的(de)野生(shēng)型cho細胞(bāo)。1968年(nián)存放在(zài)atcc中，即現(xiàn)在的(de)cho-k1（atcc ccl-61）。1985年(nián)分離出(chū)一個(gè)亞克(kè)隆保(bǎo)存(cún)在ecacc (85051005)。最(zuì)初的cho-k1細(xì)胞培養過程中需要(yào)添加血清(qīng)，并且是貼壁生長的(de)。2002年lonza公(gōng)司将(jiāng)cho-k1細胞馴(xùn)化至無(wú)血清(qīng)培養基中(zhōng)懸浮培養，建立(lì)了chok1 sv細(xì)胞，主(zhǔ)要和(hé)gs篩選系統組合(hé)使用(yòng)，在(zài)gs篩(shāi)選系(xì)統中，目的基因和單拷貝的gs基(jī)因被運(yùn)送到細(xì)胞中。穩(wěn)定的細胞在(zài)不含谷氨(ān)酸的培養基中(zhōng)進行篩選(xuǎn)，同時(shí)可以(yǐ)添(tiān)加msx增加(jiā)篩選(xuǎn)強度，最終(zhōng)達到篩選高表(biǎo)達的細胞株的(de)目的。2006年merck将(jiāng)cho-k1細胞株經(jīng)懸(xuán)浮馴化(huà)至化(huà)學限定培(péi)養(yǎng)基中，得(dé)到chozn chok1（merck，2006）細胞株(zhū)。

cho-s

1971年多倫多(duō)大學的thompso馴化出(chū)了一(yī)株(zhū)可用于(yú)懸浮培養(yǎng)的cho細(xì)胞(bāo)，能夠在生物(wù)反應器中使用(yòng)該細胞系(xì)進行(háng)更大規模(mó)的培(péi)養，1980年gibco公司将此(cǐ)細(xì)胞馴化(huà)至cd cho培(péi)養基(jī)中(zhōng)，建庫并(bìng)以cho-s名稱進行推(tuī)廣。

cho-dxb11

哥倫比亞大(dà)學的(de)urlaub和chasin生成了(le)一個dhfr位(wèi)點(diǎn)缺失(shī)，另一個(gè)隻包含了一(yī)個錯義突變的cho細(xì)胞。dhfr缺陷(xiàn)型菌(jun1)株不能生(shēng)長，除非(fēi)用(yòng)dhfr的功能性拷貝(bèi)轉染或在培(péi)養(yǎng)基中(zhōng)補充(chōng)胸苷。因此(cǐ)，将功(gōng)能性(xìng) dhfr基因(yīn)連(lián)接(jiē)到感興趣(qù)的基因（goi），轉(zhuǎn)染(rǎn)cho-dxb11細胞能(néng)夠通過在(zài)不含(hán)胸苷(gān)的培養基中培養細(xì)胞來(lái)選擇僅攜(xié)帶goi的(de)細胞(bāo)。

cho-dg44

urlaub和chasin構(gòu)建了一個(gè)完全缺失(shī)兩(liǎng)個dhfr位點(diǎn)的cho細胞系(xì)。cho-dxb11細胞(bāo)可(kě)以(yǐ)自發(fā)地恢(huī)複dhfr酶(méi)活性，使得(dé)選擇不可(kě)能。因(yīn)此他(tā)們将dhfr等位基因(yīn)雙敲除得(dé)到cho-dg44細胞株， 通過(guò)完全删除 dhfr 位點(diǎn)消除了這一問題，使 goi 選擇始終成爲可能，當細胞(bāo)被(bèi)mtx處理後可(kě)以成功的擴增轉染(rǎn)基(jī)因(yīn)。

細胞(bāo)培養搖床是工業中(zhōng)細胞培養(yǎng)所必須的，細胞(bāo)生長的狀态(tài)不(bú)僅取決于(yú)細胞(bāo)自身(shēn)的狀态、營(yíng)養物質的成分(fèn)，外界的環境也(yě)是十分的(de)重要(yào)，如搖床(chuáng)的(de)轉速(sù)，溫度，二(èr)氧化碳濃度(dù)等。我(wǒ)司一直緻力于自主(zhǔ)研發(fā)細胞培養(yǎng)所需的振(zhèn)蕩器——疊加式磁驅振蕩器：

【疊加式磁(cí)驅振(zhèn)蕩器】

特點(diǎn)：

◆ 疊加式(shì)磁驅振(zhèn)蕩器(qì)使用(yòng)磁力(lì)驅動機芯(xīn)，保持(chí)高精(jīng)度振蕩，緩(huǎn)啓緩(huǎn)停(tíng)，保證細(xì)胞培(péi)養的穩定存活，還(hái)具(jù)備超靜音運行，發熱(rè)量低，無皮帶驅動，潔淨度高，壽(shòu)命長等特(tè)點。

◆ pid控(kòng)制技(jì)術與模糊(hú)控制(zhì)技(jì)術的結合與(yǔ)創新，實現(xiàn)了溫度範圍内的高精度控制(zhì)。應用(yòng)變(biàn)頻(pín)壓縮(suō)機制(zhì)冷(lěng)，效率高(gāo)，溫度波(bō)動(dòng)度小，均勻度(dù)高。

◆ 采用(yòng)進口雙(shuāng)通道紅(hóng)外co2傳感器，結合(hé)高精度電磁閥(fá)控制，及内(nèi)部氣(qì)流(liú)合(hé)理布(bù)局，保(bǎo)證co2濃(nóng)度精(jīng)準均(jun1)勻。

◆ 溫(wēn)度、轉速、co2濃(nóng)度、濕度(dù)等數據(jù)有追溯和儲存(cún)功能(néng)，提供通訊(xùn)協議，可接(jiē)入mes系統。

◆ 可選配(pèi)主動(dòng)增濕部(bù)件來獲(huò)得持(chí)久(jiǔ)精準的濕(shī)度和較快的(de)開門恢(huī)複。

◆ 可選配先進(jìn)的wifi監控(kòng)系統(tǒng)，可多(duō)台手(shǒu)機同(tóng)時(shí)遠(yuǎn)程無(wú)線監控同(tóng)一機(jī)器，及時獲(huò)取無(wú)進氣(qì)等報警信(xìn)息以快(kuài)速處理(lǐ)緊急(jí)情況(kuàng)，安全(quán)保護培養細胞(bāo)等。