細胞(bāo)培養流程主要分爲：細胞複蘇、細胞傳代、細胞凍存

上一期已(yǐ)經向大家(jiā)介紹(shào)了細胞複蘇的相關内容，這一期我(wǒ)們一起來了解一下關于細胞傳(chuán)代的相關内容。

一(yī)、什麽是細胞傳(chuán)代？

細胞在培養皿中生長一定的時間後，達到對數生長期，被分開接種到新(xīn)的培養器皿中繼續生(shēng)長(zhǎng)或做實驗。

二、細胞傳代的具體操作步驟

貼 壁(bì) 細 胞(bāo)

01 從培養箱取(qǔ)出細胞培養瓶（一(yī)般選擇處于對數(shù)期的細胞(bāo)），轉移到超淨台。棄去原有培養液，用1-2mL PBS緩沖液洗滌1次（注意從側壁加入，以免沖掉(diào)細胞），棄去PBS緩沖液。

02 向培(péi)養瓶中加入(rù)1mL胰酶(méi)，消化，将加入(rù)胰酶的細胞培(péi)養瓶轉移到倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，當細胞變圓且大量脫落時，轉移到超淨台。

03 加入2mL完全培(péi)養基(jī)，終止消化。用移液(yè)器充分緩慢吹打(dǎ)，使細胞能夠完(wán)全脫落。然後将細胞(bāo)懸液轉移至15mL離心管(guǎn)中，1000rpm/min離心5分鍾，轉移進超淨台，打開蓋子，棄去(qù)上清。

04 用(yòng)1mL完全培養基重(zhòng)懸(xuán)細胞團塊，制備細胞懸液，然(rán)後将(jiāng)細胞懸液分裝進2個（或多個）含有4mL完全培養基的細胞培(péi)養瓶中，蓋上瓶蓋混(hùn)勻。

05 将細胞培養瓶放入37℃、5%CO2培養箱中(zhōng)繼續培養。

懸 浮 細 胞

01 從培養箱取出細胞培(péi)養瓶（一般選擇處于對數期的細胞），轉移到超(chāo)淨台。用移液器将細胞培養瓶中的細胞液轉移至15mL離(lí)心管中，1000rpm/min離心(xīn)5分鍾，轉移進超(chāo)淨台，打開蓋(gài)子，棄去上清(qīng)。

02 用1mL完全培養基重(zhòng)懸細胞團塊，制備細胞懸液，然後将(jiāng)細胞懸液分裝進2個（或多個）含有4mL完全培養基的細胞培養瓶中，蓋上瓶蓋混勻。

03 将細胞培養瓶放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續培養。

注意(yì)事項

1. 實驗過(guò)程(chéng)中每次将物品拿進超淨台中前，一定要向其(qí)噴灑75%酒精消毒(dú)，或用酒精棉球擦拭，防止(zhǐ)污染(rǎn),實驗全程無菌操作。

2. 适度消化：細胞消化的時間主要取決于消化液的種類、配制時間、加(jiā)入培養瓶中的量等，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細胞形态的變化，一(yī)旦胞質回縮，連接變松散，或有成片浮起的迹象就要加入含有血清的培養基立即終止消化。