随着(zhe)生(shēng)物醫藥的飛速發展，哺乳動物細胞已被廣泛用于重組蛋白、疫(yì)苗(miáo)、抗癌試劑及其他臨床相關的藥物的生産中(zhōng)。

現有的哺乳動物表達系統包(bāo)括中國倉鼠卵巢（CHO）細胞，齧齒動物細胞系（ＮSO, BHK, SP2/0）和人類細胞系（ＨEK293細胞(bāo), PER.C6, CAP, 纖維瘤），其中CHO細胞和(hé)ＨEK293細胞占據(jù)重要地位(wèi)。

本期主要簡述CHO細胞的發展及蛋白(bái)表達(dá)系統的特點(diǎn)

1、CHO細胞蛋白表達系統特點

（1）能(néng)在無血清(qīng)、化學成分限定的培養基中懸浮培養，穩定生長，（快速、高産、安全）；

（2）在對人(rén)類緻病性病毒方面具有一定的安全性；

（3）能夠表達與(yǔ)人相似的翻譯後修飾；

（4）較少分泌内源性蛋白，降低下遊流程的難度(dù)；

（5）易于基因調控（DHFR 或 GS缺陷型）；

（6）可瞬轉或穩轉(zhuǎn)表達蛋白。

2、CHO細胞的發展

CHO細胞來(lái)自于1958年由Puck分離(lí)的具有無性繁殖性和自發永生性的中華倉(cāng)鼠卵巢細胞。CHO細胞主要包括CHO-K1, CHO-S，CHO-DXB11和CHO-DG44。

CHO-K1

CHO-K1是未經改造的野生型CHO細胞。1968年存放在ATCC中，即現在的(de)CHO-K1（ATCC CCL-61）。1985年分離出一(yī)個亞克隆保存在ECACC (85051005)。最(zuì)初的CHO-K1細胞培養過程中需要添加血(xuè)清，并且是貼壁生長的。2002年Lonza公司将CHO-K1細胞(bāo)馴化至(zhì)無血清培養基中(zhōng)懸浮培養(yǎng)，建立(lì)了CHOK1 SV細(xì)胞，主要和GS篩選系統組合使用，在GS篩選系統中，目的基因和單拷貝的GS基(jī)因被運送到(dào)細(xì)胞中。穩定的細胞在不含谷氨酸的培養基中進行篩選，同時可以添加MSX增加篩選(xuǎn)強度，最終達到篩選高表(biǎo)達的細胞株的目的。2006年Merck将CHO-K1細胞株經懸浮馴化(huà)至化學限定培養(yǎng)基中，得到CHOZN CHOK1（Merck，2006）細胞株。

CHO-S

1971年多倫多大學的Thompso馴化出了一株(zhū)可(kě)用于懸浮培養的CHO細胞，能(néng)夠在生物(wù)反應器中使用該細胞系(xì)進行更大規模的培養，1980年Gibco公(gōng)司将此細胞馴化至CD CHO培養(yǎng)基中，建庫并以CHO-S名稱進行推廣。

CHO-DXB11

哥(gē)倫比亞大學的Urlaub和Chasin生成了一個(gè)DHFR位(wèi)點缺失，另一個隻包含了一個錯(cuò)義突變的CHO細胞。DHFR缺陷型菌(jun1)株不能生長，除非用DHFR的功能性拷貝轉(zhuǎn)染(rǎn)或在(zài)培養基中補充胸苷。因此，将(jiāng)功能性 DHFR基因連接到感興趣(qù)的基因（GOI），轉染CHO-DXB11細(xì)胞能(néng)夠通過在不含胸苷的培養基(jī)中培養細胞來選擇僅攜帶GOI的細胞。

CHO-DG44

Urlaub和Chasin構建了一個(gè)完(wán)全缺失兩個DHFR位點(diǎn)的CHO細胞系。CHO-DXB11細胞可(kě)以自發地恢複DHFR酶活性，使得選擇不可能。因此他們将(jiāng)DHFR等位基因(yīn)雙敲除(chú)得(dé)到(dào)CHO-DG44細胞株， 通過(guò)完全删除 DHFR 位點(diǎn)消除了這一問題，使 GOI 選擇始(shǐ)終(zhōng)成爲可(kě)能，當細胞被MTX處理後可以成功的擴增轉染基因。

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